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細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是觀察掌握細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)過(guò)程中細(xì)胞活動(dòng)的重要實(shí)驗(yàn)方法。

問(wèn)題一：細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)為什么這么重要

答：因?yàn)榧?xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是觀察細(xì)胞遷移活動(dòng)的重要技術(shù)手段，而且簡(jiǎn)單快捷、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠（劃重點(diǎn))。

問(wèn)題二：細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)為什么一般選擇6孔板

答：因?yàn)?孔板大小適中，可保證有相當(dāng)距離的平直劃痕，便于觀察;當(dāng)然若是需要高通量初篩時(shí)，也可以用12或者24孔板。

問(wèn)題三：為什么細(xì)胞接種密度要求過(guò)夜100%融合

答：如果過(guò)夜后細(xì)胞=沒(méi)有100%融合，雖然可以適當(dāng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，但因細(xì)胞密度已經(jīng)很大，所以細(xì)胞狀態(tài)會(huì)逐漸變差，后續(xù)細(xì)胞可能不遷移而是凋亡。

問(wèn)題四：怎樣避免細(xì)胞增殖對(duì)細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)造成的假陽(yáng)性結(jié)果

答：操作如下:

1、使用無(wú)血清或低血清培養(yǎng)基(<2%)可降低細(xì)胞增殖對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

2、一般認(rèn)為24h為細(xì)胞的一個(gè)周期，在選取合適的時(shí)間點(diǎn)(6，12，24h)檢測(cè)劃痕寬度時(shí)，不要超過(guò)細(xì)胞一個(gè)周期的時(shí)間。

問(wèn)題五：結(jié)果怎樣拍照

答：按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕，可以形成若干交叉點(diǎn)，劃痕一次與5條定位線相交，就有10個(gè)可固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)，以解決了前后觀察時(shí)位置不固定的問(wèn)題。

問(wèn)題六：細(xì)胞不遷移怎么回事

答：避開(kāi)細(xì)胞狀態(tài)的影響，需要考慮細(xì)胞自身的遷移能力，并非所有細(xì)胞都適合劃痕實(shí)驗(yàn)。

問(wèn)題七：結(jié)果統(tǒng)計(jì)中，細(xì)胞計(jì)數(shù)和統(tǒng)計(jì)面積那個(gè)好用

答：根據(jù)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇。如果細(xì)胞遷移輪廊比較清晰，并且遷移數(shù)量不多，我們可以選擇細(xì)胞計(jì)數(shù)；但如果細(xì)胞數(shù)比較多，連片生長(zhǎng)，那么統(tǒng)計(jì)面積比細(xì)胞計(jì)數(shù)的方式更簡(jiǎn)便且客觀。

問(wèn)題八：細(xì)胞劃痕技術(shù)有什么不足嗎

答：細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)的不足主要包括：

1、適用的細(xì)胞類型范圍小，一是需要遷移強(qiáng)的細(xì)胞，而且對(duì)無(wú)血清的環(huán)境有較強(qiáng)的忍受力(至少24h)12h細(xì)胞凋廣就超過(guò)50%。

2、自身操作的實(shí)驗(yàn)誤差，如劃痕距離不一致等。

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